Изучение метаболитов арахидоновой кислоты и иммунных параметров при атопическом дерматите

Азизова Гюльнара Ибрагим кызы,

доцент кафедры биохимии,

Гасанова Шайман Ибрагим кызы,

доцент кафедры биохимии.

Научный консультант – доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой биохимии

Ариф М. Эфендиев.

Азербайджанский медицинский университет.

В настоящее время во многих странах регистрируется устойчивая тен­денция к росту числа аллергических заболеваний. Особое внимание уделя­ет­ся проблеме атопического дерматита (АД) в связи с его высоким удельным весом в структуре как аллергологической, так и дерматологической патоло­гии. По данным литературы, АД имеют от 4 до 23% детей [1-4]. У части де­тей формируются тяжелые формы заболевания, торпидные к традиционной терапии, имеющие прогрессирующее течение и приводящие к инвалидизации и снижению качества жизни [5].

Центральная роль в патогенезе АД отводится иммунной системе; забо­левание рассматривается, как хроническое аллергическое иммуноза­ви­симое воспаление с генетической предрасположенностью к атопии и признаками развития вторичного иммунодефицитного состояния [6].

В последние годы опубликованы результаты исследования большого ко­личества исследований, посвященных изучению иммунитета (неспецифи­ческого, клеточного, гуморального) у больных АД.

Целью настоящей работы явилось изучение роли антител G класса и их авидитета при атопическом дерматите; определение соотношения высоко- и низкоавидных антител, а также взаимосвязи между метаболитами арахидоно­вой кислоты и иммунными показателями.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 60 больных с АД в возрасте 14-40 лет (муж­чин 63%, женщин – 37%). У большинства больных заболевание начина­лось с первых лет жизни, при этом длительность заболе­ва­ния у некоторых больных составляла 10-25 лет. Сопутствующей патоло­ги­ей чаще всего явля­лись аллергические заболевания – 50% и болезни желу­доч­но-кишечного трак­та – 30%. У 15% больных близкие родственники имели аллергические заболевания. Группой контроля служили 10 здоровых доноров в возрасте 16-30 лет.

Исследования проводились в биохимической лаборатории АМУ и в Институте Биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова в г. Москве. Содержание метаболитов арахидоновой кислоты – ЛТС₄, ЛТВ₄ и прос­тагландинов определяли методом колоночной хроматографии на крем­ние­вой кислоте с последующим анализом с помощью наборов реагентов «Amer­sham» (Англия), «Clinical Assay» (США) [7].

Оценку протективной активности В-системы иммунитета проводили на основании анализа конформационного состояния молекулы IgG и авидитета антител, для чего IgG₁ выделяли из сывороток крови доноров и больных АД методом хроматографии на ДЭАЭ сефарозе. Чистоту полученных препаратов подтверждали методом электрофореза в полиакриламидном геле и методом ра­­диальной иммунодиффузии по Ухтерлони с применением коммерческих ан­­­ти­сывороток к классам иммуноглобулинов и подклассам IgG человека, а также с помощью N-концевого секвенирования Fab и Fc фрагментов мето­дом Эдмана. Fc фрагмент получали путем гидролиза иммуногло­були­нов трип­­­сином. Гидролиз проводили в 0,05 M NH₄HCO₃ буфере, pH 7,8, при 37°C, в течение 24 ч, при соотношении фермент: субстрат 1:20. Полученные фрагменты разделяли при помощи ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефарозе [8-9].

Статистическую обработку полученных результатов проводили с по­мощью параметрических критериев пакета Biostat, 1998. Достоверность зна­чи­­мых различий средних показателей иммунитета оценивали с помощью пар­ного t-критерия Стъюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

Данные о содержании метаболитов арахидоновой кислоты у больных АД представлены в таблице 1. Для сравнительного анализа изученных пока­за­телей в периоде обострения все больные были разделены на 3 группы:

I группа – пациенты с неосложненным течением распространенного АД (n=20);

II группа – пациенты с осложненным течением распространенного АД (n=22);

III группа – пациенты с осложненным течением диффузного АД (n=18).

Полученные данные указывает на то, что в периоде обострения забо­ле­вания существенно увеличивается содержание ЛТС₄, ЛТВ₄. Уровень прос­тагландинов практически не отличался от показателей у здоровых людей.

Таблица 1.

Содержание метаболитов арахидоновой кислоты у больных атопическим дерматитом.

Прим.: * p<0,05 ** p<0,01*** p<0,001.

На основании корреляционного анализа удалось выявить две группы функционально значимых связей авидетета антител G класса с показате­ля­ми иммунограммы: с одной стороны – с ЦИК, фагоцитарной активностью ней­трофилов, способностью нейтрофилов генерировать радикалы кислорода, т.е. с комплексом показателей, которые характеризуют течение реакций, обес­пе­чивающих фагоцитоз аллергенсодержащих ЦИК, разрушение аллерге­нов и атопенов и выведение их из организма; с другой – с количеством ме­та­болитов арахидоновой кислоты – Л ТС₄ ЛТВ₄ и т.п.

Таблица 2.

Иммунологические показаетли у больных АД.

Секреция низкоавидных антител G класса с аномальной конформа­ци­ей, низкой функциональной активностью, как было показано нами ранее, при­водит к ряду последствий, среди которых наиболее важным в патогене­ти­ческом отношении является образование с антигеном мелких растворимых дли­тельно циркулирующих в крови иммунных комплексов, неспособных акти­визировать классический путь системы комплемента и подключать кас­кад клеточно-опосредованных меха­низ­мов защиты. Такие мелкие раствори­мые ЦИК обладают цитофиль­ностью, т.е. способностью к связыванию с тка­нями. Именно в силу этих причин можно считать, что аллергены и атопены, длительно циркулирующие в крови, ведут к гиперактивации В- и Т-звеньев иммунитета и супрессии антибактериальной активности макрофагальных клеток. С позиции нарастания низкоавидных IgG становятся объяснимыми персистенция в организме аллергенов и атопенов.

Таким образом, патогенез АД можно рассматривать как цепь взаимо­связанных механизмов, среди которых триггерная роль принадлежит недос­та­точности протективной функции В-системы иммунитета, связанной с сек­ре­цией антител G класса с низкими авидитетом и протективной актив­ностью, при этом аллерген-специфические CD Th 2 клоны лимфоцитов выс­тупают в качестве эффекторного звена, подключающего клеточно-опосредованные ме­ха­низмы аллергического воспаления дермы.

Выводы

Установлено, что у больных АД независимо от степени тя­жес­ти забо­лева­ния в крови происходит резкое снижение высокоавидных (до 12-25%) и нарастание низкоавидных (до 75-88%) антител G класса с аномаль­ной кон­формацией и низкой функциональной и протективной активностья­ми, что свидетельствует о нарушении протективной функции В-системы им­му­нитета. Супрессия протективной функции В-системы иммунитета, патоге­не­ти­чес­ки связанная с расстройствами фолдинга антител в плазматических клет­ках, позволяет отнести АД к заболеваниям группы вариабельной иммун­ной недостаточности. Открывается возможность для разработки способов ле­чения и профилак­тики аллергических и атопических заболеваний путем кор­рекции протек­тив­ной функции В-системы иммунитета.

Литература

1.                  Пыцкий В.И. Атопическая болезнь // Сб. трудов, Современные пробле­мы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. Материалы первой научной конференции РАКИ, ВИНИТИ РАН. – 1997. – с. 38- 45.

2.                  Виноградов А.И., Балаболкин И.И., Виноградова Н.А. Содержание эй­козаноидов у детей с атопическим дерматитом // Педиатрия, 1991, № 10, с. 29-32.

3.                  Leuhg D. Atopic dermatitis: immunobiology and treatment with immune mo­dulators // Clin. Exp. Immunol. – 1997. – vol. 107 (Suppl. 1). – p. 25-30.

4.                  Кабулов Г.Г. Распространенность симптомов атопического дерматита в регионах Азербайджана // Биомедицина, № 2, 2007, с. 16-19.

5.                  Булина О.В., Горланов И.А., Калинина Н.М. Параметры цитокинового звена иммунитета у детей старшего возраста при атопическим дерма­ти­те // Аллергология, 2004, № 1, с. 27-30.

6.                  Бережная Н.М. В-лимфоциты и патогенез атопических заболеваний // Internatiuonal Journal Immunoreabilitation. – 1997. – N. 6. – P. 101-108.

7.                  Эфендиев А.М., Помойнецкий В.Д. Методические указания к ко­ли­че­ственному анализу простагландинов, тромбоксана, простациклина и цик­лических нуклеотидов в биологических жидкостях и тканях. – Баку, 1984, 42 с.

8.                  Петрив Р.В., Лопухин Ю.М., Чередеев А.Н. и др. Оценка иммунного статуса человека: Методическая рекомендация. – Москва, 1984, 123 с.

9.                  Клиническая иммунология и аллергология: Под. Ред. Л.Йегера. – Пер. с нем. – 2-ое изд. – Москва, Медицина, 1990. - Т. 1. – 528 с.

Поступила в редакцию 13.05.2009 г.